ਜਾਣਕਾਰੀ

ਜਦੋਂ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਕੀ ਇਹ ਪੂਰੇ ਪਲਾਜ਼ਮਿਡ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਦਾ ਹੈ?

ਜਦੋਂ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਕੀ ਇਹ ਪੂਰੇ ਪਲਾਜ਼ਮਿਡ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਦਾ ਹੈ?



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

ਮੈਂ ਪੀਸੀਆਰ ਅਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਬਾਰੇ ਸਿੱਖ ਰਿਹਾ ਹਾਂ। ਮੈਂ ਸਮਝਦਾ/ਸਮਝਦੀ ਹਾਂ ਕਿ ਫਾਰਵਰਡ ਅਤੇ ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੋਨੋਂ ਹੋਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਇਹਨਾਂ ਦੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਖਾਸ ਟੁਕੜੇ ਨੂੰ ਕੱਢਣਾ ਅਤੇ ਵਧਾਉਣਾ ਹੈ।

ਜੋ ਮੈਂ ਸਮਝਣ ਲਈ ਸੰਘਰਸ਼ ਕਰ ਰਿਹਾ ਹਾਂ ਉਹ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਪਹਿਲੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਬਾਅਦ, ਇੱਕ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਗੋਲਾਕਾਰ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਕਿਉਂ ਨਹੀਂ ਬਣਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ, ਹਰੇਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਲਈ ਇੱਕ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਗੋਲਾਕਾਰ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਕਿਉਂ ਨਹੀਂ ਬਣਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਚਿੱਤਰ ਲਈ, ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਸਟ੍ਰੈਂਡ 1, ਸਟ੍ਰੈਂਡ 2, ਸਟ੍ਰੈਂਡ 3, ਸਟ੍ਰੈਂਡ 4 ਨੂੰ ਉੱਪਰ ਤੋਂ ਹੇਠਾਂ ਤੱਕ ਲੇਬਲ ਕਰਨ ਦਿਓ। (ਬਾਇਓਕੈਮਿਸਟਰੀ ਦੇ ਲੇਹਨਿੰਗਰ ਸਿਧਾਂਤ, 5ਵੀਂ ਐਡ ਤੋਂ ਚਿੱਤਰ)।

ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਇੱਥੇ ਚਿੱਤਰ ਵਿੱਚ. ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਕਲੋਨਿੰਗ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਮੈਂ ਮੰਨਦਾ ਹਾਂ ਕਿ ਸਟ੍ਰੈਂਡ 1 ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਗੋਲਾਕਾਰ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਸਟ੍ਰੈਂਡ 2 (ਜੋ ਕਿ ਸਟ੍ਰੈਂਡ 1 ਤੋਂ ਲਿਪੀਅੰਤਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ) ਵੀ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਗੋਲਾਕਾਰ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਚਿੱਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਇਸਨੂੰ ਦਿਲਚਸਪੀ ਵਾਲੀ ਥਾਂ ਦੇ ਖੱਬੇ ਪਾਸੇ DNA ਦਿਖਾਉਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

ਕੀ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਲਾਈਨ ਦੇ ਨਾਲ ਕਿਤੇ ਰੁਕ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਨੂੰ ਪੂਰੇ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਤੋਂ ਰੋਕਦਾ ਹੈ? ਜਾਂ ਕੀ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਕਦੇ ਵੀ ਇੱਕ ਚੱਕਰ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ DNA ਜੋ ਕਿ ਸਟ੍ਰੈਂਡ 2 ਦੇ ਖੱਬੇ ਪਾਸੇ ਦਿਖਾਈ ਦੇਵੇਗਾ, ਕਾਪੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਪਰ ਦਿਲਚਸਪੀ ਵਾਲੀ ਥਾਂ 'ਤੇ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਚਿੱਤਰ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।

ਤੁਹਾਡੀ ਮਦਦ ਲਈ ਧੰਨਵਾਦ.


ਪੀਸੀਆਰ ਰੇਖਿਕ ਡੀਐਨਏ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਗੋਲਾਕਾਰ ਨਹੀਂ। ਤੁਸੀਂ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪੂਰੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹੋ, ਪਰ ਡੀਐਨਏ ਅਜੇ ਵੀ ਰੇਖਿਕ ਰਹੇਗਾ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਇੱਕ ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਪਾਬੰਦੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਨਾਲ ਕੱਟਦੇ ਹੋ।

ਤਾਂ ਫਿਰ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਪੂਰੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਨਕਲ ਕਿਉਂ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ? ਚਲੋ ਮੰਨ ਲਓ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਤੋਂ 1000 ਬੇਸਾਂ ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹਣ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ। ਪੀਸੀਆਰ ਦਾ ਪਹਿਲਾ ਦੌਰ ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਲੰਬੇ ਟੁਕੜੇ ਪੈਦਾ ਕਰੇਗਾ, ਕਿਉਂਕਿ ਓਲੀਗੋਸ ਸਿਰਫ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਜਾਰੀ ਰੱਖ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਪਰ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਕਿਸੇ ਸਮੇਂ ਡਿੱਗ ਜਾਵੇਗਾ, ਜਾਂ ਤਾਂ ਬੇਤਰਤੀਬੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜਾਂ ਜਦੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਅਗਲੇ ਗੇੜ ਲਈ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਪਰ ਰਾਊਂਡ 2 ਵਿੱਚ, ਗੋਲ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਅਤੇ ਰੇਖਿਕ ਕਾਪੀ ਦੀ ਬਰਾਬਰ ਸੰਖਿਆ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ। ਲੀਨੀਅਰ ਕਾਪੀ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ ਹਰ ਦੌਰ ਵਿੱਚ ਵਧੇਗਾ। ਜਿਵੇਂ-ਜਿਵੇਂ ਲੀਨੀਅਰ ਕਾਪੀਆਂ ਵਧਦੀਆਂ ਹਨ, ਓਲੀਗੋਸ ਗੋਲਾਕਾਰ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਬਜਾਏ ਰੇਖਿਕ ਕਾਪੀਆਂ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਣ ਦੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਲੀਨੀਅਰ ਕਾਪੀਆਂ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਇਸੇ ਕਰਕੇ PCR ਉਤਪਾਦ ਦਾ ਆਕਾਰ ਕੰਟਰੋਲ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਚਲੋ ਮੰਨ ਲਓ ਕਿ ਇੱਕ ਲੀਨੀਅਰ ਕਾਪੀ 1500 ਬੇਸ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ 'ਤੇ ਦੂਜੀ ਓਲੀਗੋ ਸਾਈਟ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇੱਕ ਵਾਧੂ 500 ਬੇਸ ਚਲਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਪਰ ਜਦੋਂ ਰਿਵਰਸ ਓਲੀਗੋ ਉਸ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਲੀਨੀਅਰ ਕਾਪੀ 'ਤੇ ਬੰਨ੍ਹਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ 1000 ਬੇਸ ਚਲਾਏਗਾ ਅਤੇ ਲੀਨੀਅਰ ਕਾਪੀ ਦੇ ਸਿਰੇ ਤੋਂ ਡਿੱਗ ਜਾਵੇਗਾ। ਇਸ ਨਵੀਂ ਕਾਪੀ ਦੇ ਸਿਰੇ 'ਤੇ ਅੱਗੇ ਅਤੇ ਉਲਟ ਓਲੀਗੋ ਸਾਈਟਾਂ ਹੋਣਗੀਆਂ, ਇਸ ਲਈ ਇਹ ਸਹੀ ਆਕਾਰ ਹੈ। ਇਸ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਤੋਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀਆਂ ਕੋਈ ਵੀ ਕਾਪੀਆਂ ਵੀ ਸਹੀ ਆਕਾਰ ਦੀਆਂ ਹੋਣਗੀਆਂ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਅੱਗੇ ਵਧਦੀ ਹੈ, ਸਹੀ-ਆਕਾਰ ਦੀਆਂ ਤਾਰਾਂ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ ਵਧਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਹੋਰ ਸਹੀ-ਆਕਾਰ ਦੀਆਂ ਤਾਰਾਂ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।


ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ

ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ ਅਣੂ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦਾ ਇੱਕ ਸਮੂਹ ਹੈ ਜੋ ਮੁੜ ਸੰਯੋਜਕ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਅਤੇ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਜੀਵਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਨਿਰਦੇਸ਼ਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। [1] ਸ਼ਬਦ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਲੋਨਿੰਗ ਇਸ ਤੱਥ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਇੱਕੋ ਜਿਹੇ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਆਬਾਦੀ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਅਣੂ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜੀਵਾਣੂਆਂ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ: ਉਹ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਜੋ ਕਲੋਨ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਸਰੋਤ ਹਨ, ਅਤੇ ਉਹ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਜੋ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਲਈ ਜੀਵਤ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਨਗੀਆਂ। ਆਧੁਨਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਦਵਾਈ ਦੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਸਮਕਾਲੀ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ ਵਿਧੀਆਂ ਕੇਂਦਰੀ ਹਨ। [2]

ਇੱਕ ਰਵਾਇਤੀ ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ, ਕਲੋਨ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਦਿਲਚਸਪੀ ਵਾਲੇ ਜੀਵ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਫਿਰ ਛੋਟੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਟੈਸਟ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਹਨਾਂ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਣ। ਮੁੜ ਸੰਯੋਜਕ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਫਿਰ ਇੱਕ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਜੀਵ ਵਿੱਚ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਣ ਵਿੱਚ ਆਸਾਨ, ਸੁਭਾਵਕ, ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੇ ਤਣਾਅ ਈ. ਕੋਲੀ ਬੈਕਟੀਰੀਆ). ਇਹ ਜੀਵਾਣੂਆਂ ਦੀ ਇੱਕ ਆਬਾਦੀ ਪੈਦਾ ਕਰੇਗਾ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਾਲ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਕਿਉਂਕਿ ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਇਹ ਟ੍ਰਾਂਸਜੇਨਿਕ ਜਾਂ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਸੂਖਮ ਜੀਵ (GMO) ਹੁੰਦੇ ਹਨ। [3] ਇਹ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਇਸ ਤੱਥ ਦਾ ਫਾਇਦਾ ਉਠਾਉਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਸੈੱਲ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਨੂੰ ਲੈਣ ਅਤੇ ਦੁਹਰਾਉਣ ਲਈ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਸਿੰਗਲ ਸੈੱਲ ਨੂੰ ਫਿਰ ਇੱਕ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਫੈਲਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰੇਕ ਵਿੱਚ ਅਸਲੀ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਅਣੂ ਦੀਆਂ ਕਾਪੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਪੈਦਾ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੀ ਆਬਾਦੀ, ਅਤੇ ਮੁੜ ਸੰਯੋਜਕ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਦੋਵਾਂ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ "ਕਲੋਨ" ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਸਖਤੀ ਨਾਲ ਬੋਲਣਾ, ਮੁੜ ਸੰਜੋਗ ਡੀਐਨਏ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਵਿਧੀਆਂ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਵਿਚਾਰ ਪੈਦਾ ਹੋਇਆ ਕਿ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ ਇੱਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਹ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਕ੍ਰਮ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਲਿਜਾਏ ਜਾਣਗੇ ਅਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੇ ਹਿੱਸੇ ਵਜੋਂ ਹਜ਼ਮ ਕੀਤੇ ਜਾਣਗੇ। ਭਾਵ, ਇਹ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਲਿਜਾਣ ਲਈ ਕਲੋਨਿੰਗ ਵੈਕਟਰ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ। [4]

ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਕਿਸੇ ਵੀ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਕਲੋਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਕੁਝ ਕਾਰਕ ਹਨ ਜੋ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਸਫਲਤਾ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੀਆਂ ਉਦਾਹਰਨਾਂ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਦਾ ਕਲੋਨ ਕਰਨਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਉਲਟਾ ਦੁਹਰਾਉਣਾ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਉਤਪਤੀ, ਸੈਂਟਰੋਮੇਰਸ ਅਤੇ ਟੈਲੋਮੇਰਸ ਹਨ। ਵੱਡੇ-ਆਕਾਰ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮਾਂ ਨੂੰ ਸੰਮਿਲਿਤ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਸਫਲਤਾ ਦੀ ਘੱਟ ਸੰਭਾਵਨਾ ਵੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। 10kbp ਤੋਂ ਵੱਡੀਆਂ ਸੰਮਿਲਨਾਂ ਦੀ ਸਫਲਤਾ ਬਹੁਤ ਸੀਮਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਪਰ ਬੈਕਟੀਰੀਓਫੇਜ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬੈਕਟੀਰੀਓਫੇਜ λ ਨੂੰ 40 kbp ਤੱਕ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਸਫਲਤਾਪੂਰਵਕ ਸੰਮਿਲਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਸੋਧਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। [5]


ਸਾਰ

ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਜੈਨੇਟਿਕ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕਸ ਪ੍ਰਤੀ ਤੇਜ਼ ਵਿਰੋਧ ਅਤੇ ਐਂਟੀਸੈਪਟਿਕਸ ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਸਟੈਫ਼ੀਲੋਕੋਕਸ ਔਰੀਅਸ ਹਸਪਤਾਲ ਅਤੇ ਕਮਿਊਨਿਟੀ ਐਕੁਆਇਰਡ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਆਮ ਦੋਸ਼ੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਸ. ਔਰੀਅਸ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਐਂਟੀਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਭੀੜ ਨੂੰ ਚੁੱਕਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕਲੀਨਿਕਲ ਤੋਂ ਇੱਕ ਨਾਵਲ ਸੰਯੋਜਕ, ਮਲਟੀਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ, pC02 ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਸੀ। ਐਸ. ਔਰੀਅਸ Isolate C02. ਇਸ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵਿੱਚ ਕਲੋਰਹੇਕਸੀਡਾਈਨ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧੀ ਜੀਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ qacA, ਅਤੇ ਅਸੀਂ ਇਹ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਸੀ ਕਿ pC02 ਦੇ ਸੰਯੋਜਕ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਨੇ ਪ੍ਰਾਪਤਕਰਤਾ ਦੇ ਤਣਾਅ ਲਈ ਕਲੋਰਹੇਕਸਾਈਡਾਈਨ ਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਹੈ। ਸਿਲੀਕੋ ਵਿੱਚ pC02 ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੱਤਾ ਕਿ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pWBG749-ਸੰਯੁਕਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੇ ਪਰਿਵਾਰ ਦਾ ਹਿੱਸਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਦੇ ਤਿੰਨ ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਮੂਲ ਹਨ (oriT), ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਦੋ ਅਸੀਂ ਦਿਖਾਏ ਸਨ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਸਨ ਅਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰ ਸਕਦੇ ਸਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਜਿਸ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ oriT ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, pC02 ਦਾ ਅੰਸ਼ਕ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਲਗਾਤਾਰ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। pC02 ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਲਈ oriT ਕ੍ਰਮ, ਅਸੀਂ ਗੈਰ-ਸੰਜੋਗਤਮਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਰੂਪਾਂ ਦੀ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਯੋਗਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਜੋ ਕਈ ਕਿਸਮਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਲਈ ਇੰਜਨੀਅਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ oriT ਪਰਿਵਾਰਕ ਸੰਮਿਲਨ. ਦ oriT-ਓਟੂਨਾ ਪਰਿਵਾਰ ਨੂੰ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵਾਧੂ 'ਤੇ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ oriT ਪਰਿਵਾਰਾਂ ਨੂੰ ਵੀ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਪਰ ਘੱਟ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ 'ਤੇ। ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਸਥਿਰਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ pC02 ਦੀ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਡਰਾਪਲੇਟ ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ (ddPCR) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। pC02 ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀ ਸੈੱਲ ਲਗਭਗ 4 ਕਾਪੀਆਂ 'ਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਨਾਲ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। pC02 ਦੀ ਸੰਯੁਕਤ ਪਲਾਸਟਿਕਤਾ ਦੇ ਮੱਦੇਨਜ਼ਰ, ਅਸੀਂ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਇਹ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਸਟੈਫ਼ੀਲੋਕੋਕਲ ਸਟ੍ਰੇਨ ਅਤੇ ਸਪੀਸੀਜ਼ ਵਿੱਚ ਰੋਗਾਣੂਨਾਸ਼ਕ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਦੇ ਫੈਲਣ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।


ਮਾਨਤਾਵਾਂ

ਇਸ ਖੋਜ ਨੂੰ ਕੈਲੀਫੋਰਨੀਆ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ-ਇਰਵਿਨ ਤੋਂ C.C.L. ਤੱਕ ਉਦਾਰ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਫੰਡ ਦੁਆਰਾ ਫੰਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਅਤੇ ਏ.ਆਰ. ਨੂੰ ਯੂਐਸ ਨੈਸ਼ਨਲ ਸਾਇੰਸ ਫਾਊਂਡੇਸ਼ਨ ਗ੍ਰੈਜੂਏਟ ਰਿਸਰਚ ਫੈਲੋਸ਼ਿਪ. ਅਸੀਂ ਏ.ਪੀ. ਅਰਕਿਨ ਅਤੇ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਆਫ ਕੈਲੀਫੋਰਨੀਆ-ਬਰਕਲੇ ਦੇ ਮਿੱਲਰ ਇੰਸਟੀਚਿਊਟ ਦੇ ਮੈਂਬਰਾਂ ਦੇ ਇਸ ਵਿਚਾਰ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਹੱਲਾਸ਼ੇਰੀ ਲਈ ਬਹੁਤ ਰਿਣੀ ਹਾਂ। ਅਸੀਂ ਆਰ.ਰੇਜ਼ਵਾਨੀ, ਕੇ.ਐਫ. ਕੇਅਰਨਜ਼ ਅਤੇ ਕੇ.ਐਚ. ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਹਾਇਤਾ ਲਈ ਸਪੈਨਸਰ। ਅਸੀਂ ਮਦਦਗਾਰ ਚਰਚਾਵਾਂ ਅਤੇ ਕੁਝ ਖਮੀਰ ਸਮੀਕਰਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਦੇ ਤੋਹਫ਼ੇ ਲਈ ਜੇ.ਈ. ਡੂਬਰ (ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਆਫ਼ ਕੈਲੀਫੋਰਨੀਆ-ਬਰਕਲੇ) ਦਾ ਧੰਨਵਾਦ ਕਰਦੇ ਹਾਂ। ਅਸੀਂ ਧੰਨਵਾਦ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਪੀ.ਜੀ. ਸ਼ੁਲਟਜ਼, ਜੇ.ਏ. ਵੈੱਲਜ਼ ਅਤੇ ਜੀ.ਏ. ਸਾਡੇ ਕੰਮ 'ਤੇ ਕੀਮਤੀ ਟਿੱਪਣੀਆਂ ਲਈ ਵੇਸ.


ਸਮੱਗਰੀ

ਉੱਚ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਆਰਾਮਦਾਇਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਨੂੰ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਜਦੋਂ ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਅਰਾਮਦੇਹ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦੋ ਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ: ਐਂਟੀਸੈਂਸ ਆਰਐਨਏ ਜਾਂ ਆਈਟਰੋਨ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਮੂਹ। ਘੱਟ ਕਾਪੀ ਸੰਖਿਆ ਵਾਲੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਸਖ਼ਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਸਖ਼ਤ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ColE1 ਪ੍ਰਾਪਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ: ਐਂਟੀਸੈਂਸ RNA ਸੰਪਾਦਨ

ColE1 ਪ੍ਰਾਪਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੱਕ ਛੋਟੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ-ਏਨਕੋਡਡ RNA ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸਨੂੰ RNA I ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ColE1 ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਕਰਦਾ ਹੈ: RNA II ਪ੍ਰਮੋਟਰ। RNA II ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਮੂਲ ਦੇ ਨੇੜੇ DNA ਟੈਂਪਲੇਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਸਥਿਰ RNA-DNA ਹਾਈਬ੍ਰਿਡ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਇਸਨੂੰ RNaseH ਦੁਆਰਾ 3' OH ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਸੰਸਾਧਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸਦੀ ਵਰਤੋਂ DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ I ਮੋਹਰੀ ਸਟ੍ਰੈਂਡ DNA ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਲਈ ਕਰਦਾ ਹੈ। RNA I ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਇੱਕ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ-ਏਨਕੋਡ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜਿਸਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤੀ ਹੈ। RNA I ਬਿਲਕੁਲ RNA II ਦੇ 5' ਸਿਰੇ ਦਾ ਪੂਰਕ ਹੈ (ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ RNA II ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ DNA ਦੇ ਉਸੇ ਖੇਤਰ ਦੇ ਉਲਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਤੋਂ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ ਹੈ)। RNA I ਅਤੇ RNA II ਪਹਿਲਾਂ ਇੱਕ ਕਮਜ਼ੋਰ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ ਜਿਸਨੂੰ ਚੁੰਮਣ ਕੰਪਲੈਕਸ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਚੁੰਮਣ ਕੰਪਲੈਕਸ ਨੂੰ ਰੋਪ (ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦਾ ਦਬਾਉਣ ਵਾਲਾ) ਨਾਮਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੁਆਰਾ ਸਥਿਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ RNA-I/RNA-II RNA ਡੁਪਲੈਕਸ ਬਣਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਬਦਲਿਆ ਹੋਇਆ ਆਕਾਰ RNA II ਨੂੰ DNA ਵਿੱਚ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਤੋਂ ਰੋਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ RNaseH ਤੋਂ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਪ੍ਰੋਸੈਸ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਵਧੇਰੇ RNA I ਉਤਪੰਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਵੱਧ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ RNA I ਦੀ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਰੋਕਦੀ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਕਾਪੀ ਸੰਖਿਆ ਨੂੰ ਨਿਯਮਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। [2] [3]

R1 ਅਤੇ ColIb-p9 ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ: ਐਂਟੀਸੈਂਸ RNA ਸੰਪਾਦਨ

ਬਹੁਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਦੀਆਂ ਤਾਰਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ-ਏਨਕੋਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਰੈਪ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ,oriV) ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਲਈ। Rep ਖਾਸ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ oriV ਜੋ ਕਿ ਇੱਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਕਿਸਮ ਲਈ ਵਿਲੱਖਣ ਹਨ. ਰੈਪ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਲਈ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। R1 ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਵਿੱਚ RepA ਨੂੰ ਦੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰਮੋਟਰਾਂ ਤੋਂ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਪਹਿਲੇ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਤੋਂ ਉਦੋਂ ਤੱਕ ਬਣਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਆਪਣੇ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ 'ਤੇ ਨਹੀਂ ਪਹੁੰਚ ਜਾਂਦਾ, ਜਿਸ 'ਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ CopB ਇਸ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਨੂੰ ਦਬਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। [3] RepA ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ CopA ਨਾਮਕ ਐਂਟੀਸੈਂਸ ਆਰਐਨਏ ਦੁਆਰਾ ਸੈਕੰਡਰੀ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਤੋਂ ਪੋਸਟ-ਟਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲੀ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। CopA RepA mRNA ਵਿੱਚ ਆਪਣੇ RNA ਟੀਚੇ ਨਾਲ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਚੁੰਮਣ ਕੰਪਲੈਕਸ ਅਤੇ ਫਿਰ ਇੱਕ RNA-RNA ਡੁਪਲੈਕਸ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ RNA ਨੂੰ RNase III ਦੁਆਰਾ ਕਲੀਵ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, RepA ਦੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ। ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਜਿੰਨੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੋਵੇਗੀ, ਓਨਾ ਹੀ ਜ਼ਿਆਦਾ CopA RNA ਪੈਦਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਘੱਟ RepA ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣਾ ਵਧਦਾ ਹੈ। [4]

Col1b-P9: ਐਂਟੀਸੈਂਸ RNA ਸੰਪਾਦਨ

ਘੱਟ-ਕਾਪੀ-ਨੰਬਰ ColIb-P9 ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ Rep 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੁਆਰਾ ਪੈਦਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ repZ ਜੀਨ. repZ ਸਮੀਕਰਨ ਲਈ mRNA ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸੂਡੋਕਨੋਟ ਬਣਾਉਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। repZ ਨੂੰ ਇੱਕ ਛੋਟੇ ਐਂਟੀਸੈਂਸ ਇੰਕ RNA ਦੁਆਰਾ ਦਬਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ repZ mRNA, ਇੱਕ Inc RNA-mRNA ਡੁਪਲੈਕਸ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਸੂਡੋਕਨੋਟ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਰੋਕਦਾ ਹੈ repZ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਵਿੱਚ ਅਨੁਵਾਦ ਇਸ ਘਟਨਾ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਹੁਣ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦੀ। [5]

PSC101: ਇਟਰੋਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਸੰਪਾਦਨ

ਐਫ ਅਤੇ ਆਰਕੇ 2-ਸਬੰਧਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਸਮੇਤ ਆਈਟਰੋਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਵਿੱਚ ਓਰੀਵੀ ਖੇਤਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਮਲਟੀਪਲ (

3-7) 17-22 ਬੀਪੀ ਆਈਟਰੋਨ ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਦੁਹਰਾਓ। [3] pSC101 ਇੱਕ ਇਟਰੋਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੇ ਇੱਕ ਸਧਾਰਨ ਮਾਡਲ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਆਈਟਰੋਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੋ ਸੰਯੁਕਤ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਘੱਟ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਸਖ਼ਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ। ਇੱਕ ਤਰੀਕਾ ਹੈ RepA ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਦਾ ਨਿਯੰਤਰਣ। RepA pSC101 ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਇੱਕੋ ਇੱਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ-ਏਨਕੋਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ। RepA ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਆਪਣੇ ਖੁਦ ਦੇ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਖੇਤਰ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹ ਕੇ ਅਤੇ ਆਪਣੇ ਆਪ ਦੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ (ਟਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਆਟੋਰੈਗੂਲੇਸ਼ਨ) ਨੂੰ ਰੋਕ ਕੇ ਆਪਣੇ ਖੁਦ ਦੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਦਬਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਜਿੰਨਾ ਜ਼ਿਆਦਾ RepA ਬਣਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਓਨਾ ਹੀ ਇਸ ਦੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਦਬਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। [3] ਕਪਲਿੰਗ ਪਰਿਕਲਪਨਾ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਦੂਜੀ ਵਿਧੀ ਰੇਪ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਆਈਟਰੋਨ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੁਆਰਾ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨਾ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਉੱਚੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਰੀਪਏ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਆਈਟਰੋਨਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਦੋ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਡਾਈਮਰ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਮੂਲ ਤੇ "ਹੱਥਕੜੀ" ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹਨ। [6]

ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਅਸੰਗਤ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ ਜੇਕਰ ਉਹ ਇੱਕੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਸਾਂਝਾ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਹਨਾਂ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ, ਦੋਵੇਂ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਕੁੱਲ ਕਾਪੀ ਸੰਖਿਆ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਕੱਠੇ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖਰੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਵਜੋਂ ਮਾਨਤਾ ਨਹੀਂ ਦਿੱਤੀ ਜਾਂਦੀ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇਹ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਭਾਵਨਾ ਬਣ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਦੁਆਰਾ ਨਕਲ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਗੁੰਮ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ (ਸੈੱਲ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦਾ "ਠੀਕ" ਹੈ)। [3] ਇਹ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘੱਟ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਸੰਭਵ ਹੈ। ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਸਾਂਝੇ ਵਿਭਾਗੀਕਰਨ ਸਿਸਟਮ ਦੇ ਕਾਰਨ ਵੀ ਅਸੰਗਤ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।


ਕੋਸਮਿਡ ਕੀ ਹੈ

ਕੋਸਮਿਡ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡ ਵੈਕਟਰ ਹਨ ਜੋ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਹਨ। ਉਹ ਰੱਖਦਾ ਹੈ cos λ ਬੈਕਟੀਰੀਓਫੇਜ ਦੇ ਜੀਨ। ਇੱਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵਿੱਚ ਇੱਕਸੁਰਤਾ ਵਾਲੀ ਅੰਤ ਵਾਲੀ ਥਾਂ, cos λ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਵਾਇਰਲ ਕਣਾਂ ਵਿੱਚ ਵੀਵੋ ਵਿੱਚ ਪੈਕ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ। ਪਰ, ਬ੍ਰਹਿਮੰਡਾਂ ਵਿੱਚ ਜੀਨ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਵਾਇਰਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਏਨਕੋਡ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ, ਬ੍ਰਹਿਮੰਡਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਇਰਲ ਕਣਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਦੀ ਮਨਾਹੀ ਹੈ। ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਅਤੇ ਬ੍ਰਹਿਮੰਡ ਦੋਵੇਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਮੂਲ ਨੂੰ ਸਾਂਝਾ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਇੱਕ ਮਾਰਕਰ ਜੀਨ, ਜੋ ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਲਈ ਕੋਡ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇੱਕ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਸੰਮਿਲਨ ਲਈ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸਾਈਟ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਬ੍ਰਹਿਮੰਡ 45 kb ਆਕਾਰ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਕਿਉਂਕਿ ਬ੍ਰਹਿਮੰਡੀ ਵੈਕਟਰ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਵੱਡੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਸੰਮਿਲਿਤ ਕਰਨ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਇਹ ਵੱਡੇ ਥਣਧਾਰੀ ਜੀਨਾਂ ਜਾਂ ਬਹੁ-ਜੀਨ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਕਲੋਨ ਕਰਨ ਲਈ ਢੁਕਵੇਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।

Cosmids ਦੇ ਫਾਇਦੇ

  • ਛੋਟੇ ਕਲੋਨ ਮੈਂਬਰਾਂ ਵਾਲੀ ਜੀਨ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਨੂੰ ਬ੍ਰਹਿਮੰਡਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਪੂਰੇ ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ਫੈਲਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
  • ਇੱਕ ਵੱਡੇ ਜੀਨ ਦਾ ਬਰਕਰਾਰ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
  • ਜੈਨੇਟਿਕ ਲਿੰਕੇਜ ਅਧਿਐਨ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
  • ਬ੍ਰਹਿਮੰਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਾਲ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਵਧ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।


ਈ.ਕੋਲੀ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ | ਜੀਵ-ਰਸਾਇਣ

ਹਾਲ ਹੀ ਦੇ ਸਾਲਾਂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰੋਕਾਰਾਇਓਟਸ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫੇਜ਼ T4, T7 ਅਤੇ λ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀਆਂ ਵਿਧੀਆਂ ਹੁਣ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਜਾਣੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ B. ਸਬਟਿਲਿਸ ਦੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਗਿਆ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਪਹੁੰਚਾਂ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤੀ ਗਈ ਪ੍ਰਣਾਲੀ Escherichia coli ਰਹਿੰਦੀ ਹੈ।

ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪਹੁੰਚ:

ਪਹਿਲੇ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ, ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ I ਦੇ ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਅਤੇ ਫਿਰ ਐਨਜ਼ਾਈਮੋਲੋਜੀਕਲ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਦੇ ਪੌਲੀਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਿਧੀ ਦੀ ਬਿਹਤਰ ਸਮਝ ਦਿੱਤੀ। ਦੂਜੇ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ, ਥਰਮੋਸੈਂਸੀਟਿਵ ਕੰਡੀਸ਼ਨਲ ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਦੀ ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗਤਾ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਕੁਝ ਤਾਪਮਾਨ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਬਣਾਉਣ ਵਿੱਚ ਅਸਮਰੱਥ, ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਨੂੰ ਸਮਰੱਥ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਮਹੱਤਵ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਇਹ ਦਿਖਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ “ਰਿਪਲੀਕੇਟਿਵ” ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ I ਨਹੀਂ ਹੈ, ਪਰ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ III ਹੈ।

ਇੱਕ ਤੀਜੀ ਕਿਸਮ ਦੀ ਪਹੁੰਚ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਫੇਜ਼ਾਂ ਦੇ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ ਜਿਸਦਾ ਜੀਨੋਮ ਗੋਲਾਕਾਰ, ਸਿੰਗਲ-ਸਟੈਂਡਡ ਅਤੇ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਛੋਟਾ ਹੈ (5 ਤੋਂ 6 000 ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ)। ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਲਈ, ਇਹ ਫੇਜ਼ (M13, ϕX174, G4) ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ E.coli ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਮਸ਼ੀਨਰੀ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਨ।

ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਇਹ ਦਿਖਾਉਣਾ ਸੰਭਵ ਸੀ, ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਪ੍ਰਾਈਮੇਜ਼ ਦੀ ਹੋਂਦ, ਨਾ ਸਿਰਫ ਆਰਐਨਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹੈ ਜੋ ਫੇਜ਼ G4 ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਓਕਾਜ਼ਾਕੀ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਆਰਐਨਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵੀ ਹਨ।

ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, ਜੈਨੇਟਿਕ ਇੰਜਨੀਅਰਿੰਗ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਦੁਰਲੱਭ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨਾ, ਜਾਂ ਲੋੜੀਂਦੇ ਆਕਾਰਾਂ ਜਾਂ ਕ੍ਰਮਾਂ ਵਾਲੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਆਕਸਾਈਰੀਬੋਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਬਣਾਉਣਾ ਸੰਭਵ ਸੀ।

E.coli (oriC) ਦੇ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਉਤਪੱਤੀ ਵਾਲੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੇ ਨਿਰਮਾਣ ਅਤੇ ਫਿਰ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਇਸ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਇੱਕ ਅਰਧ-ਸ਼ੁੱਧ ਸੈੱਲ-ਮੁਕਤ ਫਰੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਹੋਣ ਲਈ ਵੱਡੀਆਂ ਤਰੱਕੀਆਂ ਕੀਤੀਆਂ ਜਾ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ। ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ, ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 25 ਜਾਣੇ-ਪਛਾਣੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹਨ ਜੋ ਈ.ਕੋਲੀ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ ਹਿੱਸਾ ਲੈਂਦੇ ਹਨ।

ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਮੂਲ 'ਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤ:

ਨੋਟ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨੁਕਤਾ ਹੈ: ਇਹ ਤੱਥ ਕਿ ਈ.ਕੋਲੀ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦਾ ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਮੂਲ ਹੈ, ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਨੂੰ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦਾ ਇੱਕ ਆਸਾਨ ਨਿਯੰਤਰਣ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਵਿਵਹਾਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੁਝ ਵੀ ਨਹੀਂ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਉਤਪੱਤੀ ਦੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਜਾਂ ਆਰਾਮ ਵਿੱਚ ਹੋਣ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਬਾਰੇ।

ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਮੂਲ 'ਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ 'ਤੇ ਗਿਆਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਰਿਹਾ ਹੈ।

ਵਾਸਤਵ ਵਿੱਚ, ਇਹਨਾਂ ਨੂੰ ਦੋ ਵਰਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ:

(a) ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ

(b) “ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ” ਜੋ oriC ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ ਹੋਰ ਸਾਈਟਾਂ 'ਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹਨ।

ਜੀਨ dnaA ਦੇ ਉਤਪਾਦ ਦਾ oriC ਨਾਲ ਖਾਸ ਬੰਧਨ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦੇ ਪਹਿਲੇ ਪੜਾਅ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਏਟੀਪੀ ਦੇ ਨਾਲ ਗੁੰਝਲਦਾਰ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਡੀਐਨਏਏ ਡਬਲ ਹੈਲਿਕਸ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹੇਗਾ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਕੰਪਲੈਕਸ ਦੇ ਗਠਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਹੋਵੇਗੀ। dnaB ਦੇ ਉਤਪਾਦ ਦੁਆਰਾ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਦੇ ਦੋ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਨਾਲ ਨਵੀਆਂ ਰੁਕਾਵਟਾਂ ਪੈਦਾ ਹੋਣਗੀਆਂ ਜੋ ਆਪਣੇ ਆਪ (ਸੁਪਰਕੋਇਲ) ਉੱਤੇ ਪੂਰੇ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਦੇ ਮਰੋੜ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਜਾਣਗੀਆਂ। ਇਹ ਸੁਪਰਕੋਇਲ ਡੀਐਨਏ ਗਾਇਰੇਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਖਤਮ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।

ਇਹ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਟੋਪੋ-ਆਈਸੋਮੇਰੇਸਜ਼ ਦੀ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ ਜੋ ਕਿ ਫਾਸਫੋਡੀਸਟਰ ਬਾਂਡ ਦੇ ਇੱਕ ਅਸਥਾਈ ਅਤੇ ਉਲਟਾਉਣ ਯੋਗ ਫਟਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਨ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਹਨ। ਕੋਈ ਅਜਿਹੀ ਸਥਿਤੀ ਦੀ ਕਲਪਨਾ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿੱਥੇ ਦੋ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਦੇ ਦੁਆਲੇ ਘੁੰਮਦੇ ਹਨ। ਡੀਐਨਏ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ “ਤਿਆਰ” ਹੈ, ਰਿਬੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਫਿਰ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਸ਼ਾਇਦ ਪ੍ਰਾਈਮੇਜ਼ ਦੁਆਰਾ।

ਇਸ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਣ ਵਾਲੇ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਕਈ ਵਾਰ ਓਰੀਸੋਮ ਨਾਮਕ ਕੰਪਲੈਕਸ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੁਝ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਓਰੀਸੀ (ਗਾਇਰੇਸ, ਡੀਐਨਏਏ) ਨੂੰ ਪਛਾਣਦੇ ਹਨ ਜਾਂ ਓਰੀਸੋਮ (ਡੀਐਨਏਬੀ, ਗਾਇਰੇਜ਼) ਦੇ ਦੂਜੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਨਾਲ ਗੱਲਬਾਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।

ਅੰਤ ਵਿੱਚ, “ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ” ਨਾਮਕ ਹੋਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ oriC (ਪ੍ਰੋਟੀਨ HU) ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ ਹੋਰ ਸਾਈਟਾਂ 'ਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਅਤੇ ਸ਼ਰਮ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਵਿੱਚ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ ਜਾਂ ਗੈਰ-ਕਾਨੂੰਨੀ ਸਾਈਟਾਂ (RNase H, ਇੱਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਜੋ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੱਕ ਆਰਐਨਏਡੀ/ਆਰਐਨਏਡੀ ਦੇ ਆਰਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ) ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ। ).

ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਫੋਰਕ ਦੀ ਤਰੱਕੀ:

ਉਹਨਾਂ ਘਟਨਾਵਾਂ 'ਤੇ ਵਿਚਾਰ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਜੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਅਤੇ ਸ਼ਾਈਸ਼ਨ ਫੋਰਕ ਦੀ ਤਰੱਕੀ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੰਦੇ ਹਨ, ਇੱਥੇ ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ ਵਰਣਨ ਕਰਨਾ ਲਾਭਦਾਇਕ ਹੋਵੇਗਾ, ਈ.ਕੋਲੀ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦਾ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਏਜੰਟ: ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ III ਹੋਲੋਐਨਜ਼ਾਈਮ।

ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਉੱਪਰ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਇਸ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਤਿੰਨ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ ਹਨ। ਇਹ ਤਿੰਨ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਕੁਝ ਬਾਇਓਕੈਮੀਕਲ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਦੁਆਰਾ ਵੱਖਰੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਅਰਧ-ਸ਼ੁੱਧ ਕੱਡਣ ਵਿੱਚ ਜਾਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੇ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਦੌਰਾਨ ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੇ ਹਨ। ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ III ਹੋਲੋਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਫੋਰਕ 'ਤੇ ਦੋ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਦੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹੈ।

ਇਹ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 7 ਉਪ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਤੋਂ ਬਣਿਆ ਹੈ: ਇਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਤਿੰਨ ਕੋਰ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ 4 ਹੋਰ ਸਹਾਇਕ ਉਪ-ਇਕਾਈਆਂ ਹਨ। ਕੋਰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਵਿੱਚ ਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਸਬ-ਯੂਨਿਟ, 3′ —′ —> 5′ ਐਕਸ-ਓਨਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ (“ਰਿਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ”) ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਸਬ-ਯੂਨਿਟ ਅਤੇ ਇੱਕ ਤੀਜਾ, θ, ਜਿਸਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਅਜੇ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਅਗਿਆਤ ਚਾਰ ਹੋਰ ਉਪ-ਇਕਾਈਆਂ (τ, γ, β ਅਤੇ δ) ਪੌਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ ਦੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੌਰਾਨ ਕੋਰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ।

ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਕਦਮ ਦੀ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਅੰਜੀਰ ਵਿੱਚ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। 6.32 ਅਸੀਂ ਉੱਪਰ ਜ਼ਿਕਰ ਕੀਤਾ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਇੱਕ ਸਟ੍ਰੈਂਡ 'ਤੇ ਨਿਰੰਤਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ (ਦੇਖੋ ਅੰਜੀਰ 6.32 ਭਾਗ e) ਅਤੇ ਦੂਜੇ 'ਤੇ ਨਿਰੰਤਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇੱਕ ਨੂੰ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੀਆਂ ਦੋ ਤਾਰਾਂ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਣਾ ਜਾਰੀ ਰੱਖਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ ਇੱਕ ਡੀਐਨਏ ਹੈਲੀਕੇਸ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ (ਵੇਖੋ ਚਿੱਤਰ 6.32, ਭਾਗ a)।

ਇਹ ਅਜੇ ਤੱਕ ਪਤਾ ਨਹੀਂ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਕਿਹੜਾ ਹੈਲੀਕੇਸ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ (ਜੀਨ ਡੀਐਨਏਬੀ ਜਾਂ ਜੀਨ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਦਾ ਉਤਪਾਦ?)। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਇੱਕ ਟੋਪੋਇਸੋਮੇਰੇਜ਼, ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਗਾਇਰੇਜ਼ (ਅੰਜੀਰ 6.32, ਭਾਗ ਬੀ ਦੇਖੋ) ਦੀ ਮਦਦ ਨਾਲ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬਣੇ ਸੁਪਰਕੋਇਲਾਂ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਦੇ ਦੋ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਣ ਨਾਲ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਜ਼ੋਨ ਬਣਦੇ ਹਨ।

ਇਹ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਜ਼ੋਨ ਲਾਜ਼ਮੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਟਾ&ਸ਼ਾਈਬਿਲਾਈਜ਼ ਕੀਤੇ ਜਾਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ (ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਦੇ ਦੋ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਦੇ ਪੁਨਰ-ਸਬੰਧ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ) ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਡੀਗਰੇਡ ਕਰਨ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਐਨਜ਼ਾਈਮਜ਼ (DNase) ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਤੋਂ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਫੰਕਸ਼ਨ ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਜਿਸਨੂੰ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਬਾਈਡਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਸਦੇ ਸੰਖੇਪ SSB ਦੁਆਰਾ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (ਦੇਖੋ ਚਿੱਤਰ 6.32, ਭਾਗ c)।

ਓਕਾਜ਼ਾਕੀ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਰਿਬੋਨਿਊਕਲੀਓਟਿਡਿਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰਜ਼ ਪ੍ਰਾਈਮੇਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ (ਅੰਜੀਰ 6.32, ਭਾਗ ਡੀ ਦੇਖੋ)। ਇਸ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ RNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਤੋਂ ਰਿਫੈਮਪਿਸਿਨ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਦੁਆਰਾ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਬਿਨਾਂ ਕਿਸੇ ਖਾਸ ਕ੍ਰਮ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੇ ਛੋਟੇ RNA ਟੁਕੜਿਆਂ (ਲਗਭਗ 10 ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ) ਦਾ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ III ਹੋਲੋਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੁਆਰਾ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

ਇਸ ਲਈ ਇਹ ਇੱਕ ਚੇਨ ਦੇ ਗਠਨ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇਸਦੇ 5′ ਸਿਰੇ 'ਤੇ, ਇੱਕ ਆਰਐਨਏ ਟੁਕੜਾ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਨਾਲ ਸਹਿਭਾਗੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੁੜਿਆ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (ਵੇਖੋ ਚਿੱਤਰ 6.32, ਭਾਗ f)। ਪਰ ਅਸੀਂ ਜਾਣਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਜਦੋਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਪੂਰੀ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਰਿਬੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ। ਇਸ ਲਈ ਰਿਬੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਫਿਰ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬਣਾਏ ਗਏ ਪਾੜੇ ਨੂੰ ਭਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ।

ਇਹ ਦੋ ਫੰਕਸ਼ਨ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ I ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਇਸਦੀ 5′ → 3′ ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ (ਜੋ ਕਿ ਡੀਐਨਏ ਲਈ ਖਾਸ ਨਹੀਂ ਹੈ) ਦੇ ਕਾਰਨ ਰਿਬੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਨਾਲ ਹੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਵਰਤਦੇ ਹੋਏ ਗੁੰਮ ਹੋਏ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀ&ਸ਼ਮਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਅਗਲੇ ਓਕਾਜ਼ਾਕੀ ਟੁਕੜੇ ਦਾ 3′ ਸਿਰਾ, ਭਾਵ ਰੀਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਫੋਰਕ ਦੇ ਪਾਸੇ ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਨੇੜੇ (ਅੰਜੀਰ 6.32, ਭਾਗ g ਦੇਖੋ)।

ਇਸ ਲਈ ਇਸ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦਾ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨਿਰੰਤਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਫਿਰ ਜੁਕਸਟਾਪੋਜ਼ਡ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਇਨ੍ਹਾਂ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਸਹਿ-ਸਹਿਯੋਗ ਨਾਲ ਜੋੜਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ। ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਲਿਗੇਸ ਦੁਆਰਾ ਪੂਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਇੱਕ 3′-OH ਅਤੇ ਇੱਕ 5′- ਮੋਨੋਫੋਸਫੇਟ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਫਾਸਫੋਡੀਸਟਰ ਬਾਂਡ ਬਣਾਉਣ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਹੈ, ਬਸ਼ਰਤੇ ਕਿ ਇਹ ਸਮੂਹ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਦੇ ਨੇੜੇ ਬਣਾਏ ਗਏ ਹੋਣ ਕਿਉਂਕਿ ਨਵੇਂ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਬਾਂਡਾਂ ਦਾ ਆਦਾਨ-ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਪੇਰੈਂਟਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ।

ਜੇ 5′-ਮੋਨੋਫੋਸਫੇਟ ਇੱਕ ਰਿਬੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਲਾਜ਼ਮੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਓਕਾਜ਼ਾਕੀ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ ਆਰਐਨਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਦਾ ਸੰਕੇਤ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਡੀਐਨਏ ਲਿਗੇਸ ਬੰਦ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦਾ।

ਇਸ ਗੱਲ 'ਤੇ ਜ਼ੋਰ ਦਿੱਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇੱਥੇ ਵਰਣਨ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸਥਿਤੀ ਅਜੇ ਵੀ ਇੱਕ ਨਮੂਨਾ ਹੈ, ਬਹੁਤ ਸੰਭਾਵਿਤ, ਪਰ ਸਾਬਤ ਨਹੀਂ ਹੋਈ. ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, ਹੋਰ ਪਰਿਕਲਪਨਾ - ਪੂਰਕ - ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਣ ਲਈ, ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਸ ਤੱਥ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਣ ਲਈ ਕਿ, ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਫੋਰਕ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਅੱਗੇ ਵਧਦਾ ਹੈ (500 ਤੋਂ 1 000 ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਪ੍ਰਤੀ ਸਕਿੰਟ)।

ਵੱਖ-ਵੱਖ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਬਿਹਤਰ ਤਾਲਮੇਲ ਲਈ, ਬਾਅਦ ਵਾਲੇ ਨੂੰ ਇੱਕ ਬਹੁ-ਐਨਜ਼ਾਈਮਿਕ ਕੰਪਲੈਕਸ ਵਿੱਚ ਸਰੀਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: ਰਿਪਲੀਸੋਮ (ਵੇਖੋ ਚਿੱਤਰ 6.33)। ਇਸ ਕਾਲਪਨਿਕ ਢਾਂਚੇ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ III ਦੇ 2 ਅਣੂ, ਇੱਕ ਜਾਂ ਕਈ ਡੀਐਨਏ ਹੈਲੀਕੇਸ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮੋਸੋਮ (ਜ਼ੰਜੀਰਾਂ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦੇਣ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਸਮੂਹ) ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।

ਇਸ ਸੰਰਚਨਾ ਨੂੰ 2 ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਨੂੰ ਨਾਲੋ-ਨਾਲ ਦੁਹਰਾਉਣ ਦੇ ਯੋਗ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਕਿਸੇ ਨੂੰ ਇਹ ਕਲਪਨਾ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ ਕਿ ਜਿਸ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦੀ ਨਕਲ ਕੀਤੀ ਜਾਏਗੀ, ਉਹ 180° 'ਤੇ ਆਪਣੇ ਆਪ 'ਤੇ ਲਗਾਤਾਰ ਹਵਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਦੋ ਪੈਰੇਂਟਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਨੂੰ ਫੋਰਕ 'ਤੇ, ਸਥਾਨਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੱਕੋ ਜਿਹੀ ਧਰੁਵੀ ਹੋਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।

ਅਜਿਹੀ ਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ, ਨਾ ਸਿਰਫ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਅਣੂ (ਜਾਂ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਡਾਈਮਰ) ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਦੋ ਚੇਨਾਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰੇਗਾ, ਬਲਕਿ ਇਹ ਪ੍ਰਾਈਮੋਸੋਮ ਨਾਲ ਵੀ ਜੁੜਿਆ ਰਹੇਗਾ ਜੋ ਵਿਘਨਸ਼ੀਲ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਸਟ੍ਰੈਂਡ 'ਤੇ ਐਲੋਗਾ ਅਤੇ ਸ਼ਾਈਸ਼ਨ ਦੇ ਉਲਟ ਦਿਸ਼ਾ ਵਿੱਚ ਅੱਗੇ ਵਧਦਾ ਹੈ। .

ਜਿੱਥੋਂ ਤੱਕ ਸਮਾਪਤੀ ਦਾ ਸਬੰਧ ਹੈ, ਇਹ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਈ.ਕੋਲੀ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਚੁੱਪ ਸਮਾਪਤੀ ਖੇਤਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਿੱਥੇ ਦੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਕਾਂਟੇ ਹੌਲੀ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਖੇਤਰ ਉੱਤੇ ਜਾਣਾ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ ਦਾ ਸੰਕੇਤ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਈ.ਕੋਲੀ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ 'ਤੇ ਨਵੀਂ ਕਲਪਨਾ:

ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦੇ ਸਬੰਧ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਪ੍ਰਤੀਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੀ ਝਿੱਲੀ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਇੱਕ ਪਾਸੇ ਕਿਉਂਕਿ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਡੀਐਨਏਏ ਇਸ ਝਿੱਲੀ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਕਿਉਂਕਿ ਕੰਪਲੈਕਸ ਡੀਐਨਏਏ-ਏਟੀਪੀ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਇੱਕ ਝਿੱਲੀ ਦੁਆਰਾ ਸੋਧਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਫਾਸਫੋਲਿਪਿਡ: ਕਾਰਡੀਓਲਿਪਿਨ.

ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ, ਇੱਕ ਤਾਜ਼ਾ ਅਨੁਮਾਨ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ III ਹੋਲੋਏਂਜ਼ਾਈਮ ਇੱਕ ਅਸਮਿਤ ਡਾਇਮਰ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਹੈ। ਇਹ ਅਸੀਮ ਅਤੇ ਸ਼ਾਈਮੈਟਰੀ ਦੋ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਮਾਨ ਉਪ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਦੀ ਆਪਸੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੋਵੇਗੀ। γ ਉਪ-ਇਕਾਈ ਵਾਲੇ ਡਾਈਮਰ ਦਾ ਅੱਧਾ ਹਿੱਸਾ ਨਿਰੰਤਰ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕਰੇਗਾ ਅਤੇ ਦੂਜਾ ਅੱਧਾ ਹਿੱਸਾ ਜਿਸ ਵਿੱਚ τ ਉਪ-ਯੂਨਿਟ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਨਿਰੰਤਰ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰੇਗਾ।


ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਵਾਧੂ-ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮਲ ਡੀਐਨਏ ਤੱਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ. ਇਹ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਛੋਟੇ (ਕੁਝ 1000 bp), ਗੋਲਾਕਾਰ, ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਅਣੂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਦੀ ਸੁਤੰਤਰ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਕਲ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਦੇ ਅੰਦਰ ਉੱਚ ਕਾਪੀ ਸੰਖਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਜੰਗਲੀ ਵਿੱਚ, ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਮੇਲ ਦੌਰਾਨ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਈ ਵਾਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦਵਾਈ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਕਿਉਂਕਿ ਉਹ ਅਕਸਰ ਜਰਾਸੀਮ ਅਤੇ ਡਰੱਗ-ਰੋਧ ਲਈ ਜੀਨ ਰੱਖਦੇ ਹਨ। ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਵਿੱਚ, ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿਸਨੂੰ ਪਰਿਵਰਤਨ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

ਪਲਾਜ਼ਮਿਡ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਾ ਪਾਉਣ ਲਈ, ਟੁਕੜੇ ਅਤੇ ਗੋਲਾਕਾਰ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੋਨਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪਾਬੰਦੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੱਟਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਅਨੁਕੂਲ ਸਿਰੇ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਚਿੱਤਰ (PageIndex<1>))। ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਉਪਲਬਧ ਪਾਬੰਦੀਆਂ ਵਾਲੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਨੂੰ ਦੇਖਦੇ ਹੋਏ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਜਿਹੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਲੱਭਣਾ ਬਹੁਤ ਮੁਸ਼ਕਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ ਜਿਸ ਲਈ ਪਲਾਜ਼ਮਿਡ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਫਰੈਗਮੈਂਟ ਦੋਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਬੰਧਿਤ ਮਾਨਤਾ ਕ੍ਰਮ ਮੌਜੂਦ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕਿਉਂਕਿ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵੈਕਟਰ ਇੰਜਨੀਅਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ। ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਪਾਬੰਦੀਆਂ ਵਾਲੇ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਲਈ ਮਾਨਤਾ ਵਾਲੀਆਂ ਸਾਈਟਾਂ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਲਈ।

ਚਿੱਤਰ (PageIndex<1>): ਇੱਕ DNA ਟੁਕੜੇ (ਲਾਲ) ਦਾ ਇੱਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵੈਕਟਰ ਵਿੱਚ ਕਲੋਨਿੰਗ। ਵੈਕਟਰ ਵਿੱਚ ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਇੱਕ ਚੋਣਯੋਗ ਮਾਰਕਰ ਜੀਨ (ਨੀਲਾ) ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਇੱਕ ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਜੀਨ। (ਮੂਲ-ਡੀਹੋਲੋਸ-CC:AN)

ਪਾਬੰਦੀ ਹਜ਼ਮ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਲੋੜੀਂਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਹੋਰ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠੇ ਜੋੜਨ ਲਈ ਲੀਗੇਸ ਨਾਲ ਮਿਲਾਉਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਚੁਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਥੋੜ੍ਹੇ ਜਿਹੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਨਵੇਂ ਲਿਗੇਟਿਡ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਦਿਲਚਸਪੀ ਦਾ ਜੀਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਤਬਦੀਲ ਵਿੱਚ ਈ. ਕੋਲੀ. ਪਰਿਵਰਤਨ ਲੀਗੇਟਿਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਮਿਲਾ ਕੇ ਪੂਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਈ. ਕੋਲੀ ਸੈੱਲ ਜੋ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬਣਾਏ ਗਏ ਹਨ ਕਾਬਲ) ਡੀਐਨਏ ਲੈਣ ਲਈ. ਯੋਗ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ CaCl ਵਰਗੇ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਦੁਆਰਾ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ2 ਜਾਂ ਬਿਜਲੀ ਦੇ ਖੇਤਰਾਂ ਨੂੰ (ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਪੋਰੇਸ਼ਨ). ਕਿਉਂਕਿ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਮਿਲਾਏ ਗਏ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਜਿਹਾ ਹਿੱਸਾ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਜਾਵੇਗਾ, ਏ ਚੋਣਯੋਗ ਮਾਰਕਰ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਲਈ ਇੱਕ ਜੀਨ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ 'ਤੇ ਵੀ ਮੌਜੂਦ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਪਰਿਵਰਤਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ (ਸਮਰੱਥ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਸੰਯੋਜਨ), ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਇੱਕ ਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਅਗਰ ਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਢੁਕਵੇਂ ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕ ਨਾਲ ਫੈਲ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਤਾਂ ਜੋ ਸਿਰਫ ਉਹ ਸੈੱਲ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਹੋਵੇ, ਵਧਣ ਅਤੇ ਕਲੋਨੀਆਂ ਬਣਾਉਣ ਦੇ ਯੋਗ ਹੋ ਸਕਣ। ਇਸਨੂੰ ਫਿਰ ਚੁਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਅਗਲੇਰੀ ਅਧਿਐਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨੀ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਨ ਵੈਕਟਰ ਕਲੋਨ ਕੀਤੇ ਡੀਐਨਏ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਦਿਲਚਸਪੀ ਦੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ, ਵਧਾਉਣ, ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰਨ ਅਤੇ ਕਈ ਵਾਰ ਪ੍ਰਗਟ ਕਰਨ ਲਈ। ਅਕਸਰ, ਇੱਕ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਪਹਿਲਾ ਕਦਮ ਹੈ ਕਲੋਨ (ਅਰਥਾਤ ਨਕਲ) ਇੱਕ ਜੀਨ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵਿੱਚ, ਫਿਰ ਇਸ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਦਿਓ ਤਾਂ ਜੋ ਜੀਨ ਦੀਆਂ ਬੇਅੰਤ ਕਾਪੀਆਂ (ਅਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮਿਡ ਜੋ ਇਸਨੂੰ ਲੈ ਕੇ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ) ਨੂੰ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਪ੍ਰਜਨਨ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ। ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਹੋਰ ਹੇਰਾਫੇਰੀ ਲਈ ਇੱਕ ਵਿਹਾਰਕ ਲੋੜ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਦੀਆਂ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਤਕਨੀਕਾਂ ਇੱਕ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ਼ ਇੱਕ ਅਣੂ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਨ ਲਈ ਇੰਨੀਆਂ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ ਅਤੇ ਪੁਨਰ-ਸੰਯੋਜਨ ਪ੍ਰਯੋਗ ਇਸ ਲਈ ਦੁਹਰਾਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਹਨ ਜਿਸ ਵਿੱਚ:

  1. ਇੱਕ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਾ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਪਾਚਨ ਪਾਬੰਦੀ ਦੁਆਰਾ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ) ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲ ਪਾਬੰਦੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਕੱਟ ਵਿੱਚ ਕਲੋਨ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ
  2. ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ
  3. ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਨੂੰ ਗੁਣਾ ਕਰਨ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੱਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਤਰਲ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਵਿੱਚ
  4. ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਇੱਕ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਸਭਿਆਚਾਰ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ
  5. ਹੋਰ ਹੇਰਾਫੇਰੀ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸਾਈਟ ਡਾਇਰੈਕਟਡ ਮਿਊਟਾਜੇਨੇਸਿਸ ਜਾਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਕਿਸੇ ਹੋਰ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਜਾਣ-ਪਛਾਣ) ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪਲਾਜ਼ਮਿਡ 'ਤੇ ਕਰਵਾਏ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।
  6. ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੁਬਾਰਾ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਹੋਰ ਹੇਰਾਫੇਰੀ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਜਾਂ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਲਈ

ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ ਦੀ ਇੱਕ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ: ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦਾ ਉਤਪਾਦਨ

ਸ਼ੁੱਧ ਇਨਸੁਲਿਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸ਼ੂਗਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ

1980, ਕਲੀਨਿਕਲ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੂੰ ਮਨੁੱਖੀ ਲਾਸ਼ਾਂ ਜਾਂ ਸੂਰਾਂ ਵਰਗੇ ਕੱਟੇ ਗਏ ਜਾਨਵਰਾਂ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਮਨੁੱਖੀ-ਨਿਰਮਿਤ ਇਨਸੁਲਿਨ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਿਹਤਰ ਫਾਰਮਾਕੋਲੋਜੀਕਲ ਗੁਣਾਂ ਦੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਸੀਮਤ ਸਪਲਾਈ ਵਿੱਚ ਸੀ ਅਤੇ ਬਿਮਾਰੀ ਦੇ ਸੰਚਾਰਨ ਦੇ ਜੋਖਮਾਂ ਨੂੰ ਲੈ ਕੇ ਸੀ। ਮਨੁੱਖੀ ਇਨਸੁਲਿਨ ਜੀਨ ਨੂੰ ਕਲੋਨ ਕਰਕੇ ਅਤੇ ਇਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਈ. ਕੋਲੀ, ਮਨੁੱਖੀ ਹਾਰਮੋਨ ਦੇ ਸਮਾਨ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੀ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਫਰਮੈਂਟਰਾਂ ਵਿੱਚ, ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਪੈਦਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦਾ ਉਤਪਾਦਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਰੂਪਾਂ ਨੂੰ ਵੀ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ: ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਕੁਝ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡਾਂ ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ, ਹਾਰਮੋਨ ਦੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਕੰਮ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਰੂਪ ਬਣਾਏ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਇਨਸੁਲਿਨ ਹਾਰਮੋਨ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 21 ਅਤੇ 30 ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਦੇ ਦੋ ਪੇਪਟਾਇਡ ਟੁਕੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਅੱਜ, ਜ਼ਰੂਰੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਾਰੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਮੁੜ ਸੰਜੋਗ ਸਰੋਤਾਂ (ਚਿੱਤਰ (PageIndex<2>)) ਤੋਂ ਪੈਦਾ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਰਥਾਤ ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਨਾਂ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਜੋ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਜਾਂ ਖਮੀਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।

ਚਿੱਤਰ (PageIndex<2>): ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੀ ਇੱਕ ਸ਼ੀਸ਼ੀ। ਨੋਟ ਕਰੋ ਕਿ ਲੇਬਲ ਮੂਲ ਨੂੰ &ldquorDNA&rdquo ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਸੂਚੀਬੱਧ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦਾ ਅਰਥ ਹੈ ਪੁਨਰ-ਸੰਯੋਜਕ DNA। (Flickr-DeathByBokeh-CC:AN)


ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਵੈਕਟਰਾਂ ਦੀਆਂ ਜ਼ਰੂਰੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ

ਟੈਟਰਾਸਾਈਕਲੀਨ ਰਾਈਬੋਸੋਮ ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਰਾਈਬੋਸੋਮ ਦੇ 30S ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਜੋੜਦਾ ਹੈ
ਟੈਟ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਟੈਟਰਾਸਾਈਕਲੀਨ ਨੂੰ ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੋਣ ਤੋਂ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।

ਕਲੋਰਾਮਫੇਨਿਕੋਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਰਾਇਬੋਸੋਮ ਦੇ 50S ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਜੋੜਦਾ ਹੈ
ਕੈਟ (ਕਲੋਰਾਮਫੇਨਿਕੋਲ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ) ਇੱਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਸਿਸਟਮ ਕੰਪੋਨੈਂਟ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਕਲੋਰਾਮਫੇਨਿਕੋਲ ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਜਿਹੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਬਦਲਦਾ ਹੈ ਜੋ ਰਾਈਬੋਸੋਮ ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹ ਨਹੀਂ ਸਕਦਾ।

ਕਨਾਮਾਈਸਿਨ (ਅਤੇ ਨਜ਼ਦੀਕੀ ਸਬੰਧਿਤ ਨਿਓਮਾਈਸਿਨ) ਐਮੀਨੋਗਲਾਈਕੋਸਾਈਡਸ ਹਨ ਜੋ ਰਾਈਬੋਸੋਮ ਦੇ ਉਪ-ਕੰਪੋਨਾਂ ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹਨ।
ਕੈਨ (ਅਤੇ ਨਿਓ) ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਪੈਰੀਪਲਾਸਮਿਕ ਸਪੇਸ ਵਿੱਚ ਸਥਿਤ ਇੱਕ ਐਮੀਨੋਗਲਾਈਕੋਸਾਈਡ ਫਾਸਫੋਟ੍ਰਾਂਸਫੇਰੇਸ ਦੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਆਵਾਜਾਈ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।


ਹੋਰ ਕਾਰਕ ਜੋ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ

ਹਾਲਾਂਕਿ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਨਿਯਮ ori ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੀ ਕਾਪੀ ਸੰਖਿਆ ਨੂੰ ਨਾਟਕੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਹੋਰ ਬਾਹਰੀ ਕਾਰਕ ਵੀ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਜੇ ਤੁਸੀਂ ਆਪਣੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਦੀ ਯੋਜਨਾ ਬਣਾ ਰਹੇ ਹੋ ਤਾਂ ਇਹ ਵਿਚਾਰ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਣ ਲਈ ਲਾਭਦਾਇਕ ਹਨ:

  • ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਦੀਆਂ ਘੱਟ ਕਾਪੀਆਂ ਨੂੰ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਦੇ ਹਨ ਜੇਕਰ ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਡੇ ਸੰਮਿਲਨ ਜਾਂ ਜੀਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਇੱਕ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇ ਉਤਪਾਦ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।

ਦ ਈ. ਕੋਲੀ ਤਣਾਅ

ਵਿਕਾਸ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ

  • ਹਵਾਬਾਜ਼ੀ ਦੀ ਮਾਤਰਾ, ਤਾਪਮਾਨ, ਕਲਚਰ ਵਾਲੀਅਮ, ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕ ਅਤੇ ਮਾਧਿਅਮ ਸਭ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਕੁੱਝ oriਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੋਰ ਹਨ oriਕਲੋਰੈਮਫੇਨਿਕੋਲ ਦੇ ਜੋੜ ਨਾਲ ਹੋਰ ਕਾਪੀਆਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ "ਚਲਿਆ" ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ - ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਤੁਹਾਡੀ ਵਿਕਾਸ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਤੁਹਾਡੇ ਵਿਰੁੱਧ ਕੰਮ ਨਹੀਂ ਕਰ ਰਹੀਆਂ ਹਨ!

ਕਲਚਰ inoculum

  • ਤਾਜ਼ੇ ਸਟ੍ਰੀਕਡ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਉੱਚੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ - ਅਨੁਕੂਲ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ ਹਮੇਸ਼ਾ ਇੱਕ ਕਲੋਨੀ ਚੁਣੋ ਅਤੇ ਗਲਾਈਸਰੋਲ ਸਟਾਕਾਂ, ਅਗਰ ਸਟੈਬਸ, ਜਾਂ ਤਰਲ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉਪ-ਸਭਿਆਚਾਰ ਨਾ ਕਰੋ।
  • ਤਾਜ਼ੇ ਰੂਪਾਂਤਰਿਤ ਸੈੱਲ ਇੱਕ ਉੱਚ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਉਪਜ ਵੀ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਕਿ ਕਲੋਨੀਆਂ ਇੱਕ ਗਲਾਈਸਰੋਲ ਸਟਾਕ ਤੋਂ ਸਟ੍ਰੀਕ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ।
  • 12-16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣਾ ਵਧੇਰੇ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਹੁਣੇ ਹੀ ਸਥਿਰ ਪੜਾਅ 'ਤੇ ਪਹੁੰਚ ਗਿਆ ਹੈ, ਪਰ ਸੈੱਲਾਂ ਨੇ ਮਰਨਾ ਸ਼ੁਰੂ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਹੈ।

ਕੋਈ ਸਵਾਲ ਹੈ? ਕੁਝ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ? ਜੇ ਅਜਿਹਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਟਿੱਪਣੀਆਂ ਵਿੱਚ ਪੋਸਟ ਕਰੋ. ਨਾਲ ਹੀ, ਸਾਨੂੰ ਦੱਸੋ ਕਿ ਕੀ ਤੁਹਾਡੇ ਕੋਲ ਭਵਿੱਖ ਦੇ Plasmids 101 ਸੀਰੀਜ਼ ਦੇ ਵਿਸ਼ਿਆਂ ਲਈ ਕੋਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਬੇਨਤੀਆਂ ਹਨ ਅਤੇ ਅਗਲੀ ਕਿਸ਼ਤ ਲਈ ਜੁੜੇ ਰਹੋ।


ਵੀਡੀਓ ਦੇਖੋ: The Legends - Jagjit u0026 Chitra Singh, Kothe Te Aa Mahiya - Punjabi Tappe, recorded at BBC in 1979 (ਅਗਸਤ 2022).